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各类显微镜检术




来源:本站
时间:2011-5-4 15:52:33

金相显微镜
如何用镜检术£º在材料研究领域£¬反射式明场显微镜得到广泛应用£¬在此基础上各种特殊的镜检方法也得到应用£¬如暗场£¬偏光£¬相衬£¬干涉£¬荧光£¬这些镜检方法在高档显微镜上均能同时实现¡£

一¡¢明视野观察£¨Bright field£©
明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式£¬广泛应用于病理¡¢检验£¬用于观察被染色的切片£¬所有显微镜均能完成此功能¡£在此不再赘述¡£

二¡¢暗视野观察£¨Darkfield£©
暗视野实际是暗场照明¡£它的特点和明视野不同£¬不直接观察到照明的光线£¬而观察到的是被检物体反射或衍射的光线¡£因此£¬视场成为黑暗的背景£¬而被检物体则呈现明亮的像¡£暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现像£¬微尘在强光直射通过的情况下£¬人眼不能观察£¬这是因为强光绕射造成的¡£若把光线斜射它£¬由于光的反射£¬微粒似乎增大了体积£¬为人眼可见¡£暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜¡£它的特点是不让光束Ó上Â至上的通过被检物体£¬而是将光线改变途径£¬使其斜射向被检物体£¬使照明光线不直接进入物镜£¬利用被检物体表面反射或衍射的光形成明亮图像¡£暗视野观察的·直æ率远高于明视野观察£¬最高达0.02¡ª0.004mm¡£

三¡¢相衬镜检法£¨Phasecontrast£©
在光学显微镜的发展过程中£¬相衬镜检术的发明成功£¬是近代显微镜技术中的重要成就¡£我们知道£¬人眼只能区分光波的波长£¨颜色£©和振幅£¨亮度£©£¬对于无色通明的生物标本£¬当光线通过时£¬波长和振幅变化不大£¬在明场观察时很难观察到标本¡£
相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检£¬也就是有效地利用光的干涉现像£¬将人眼不可·直æ的相位差变为可·直æ的振幅差£¬即使是无色透明的物质也可成为清晰可见¡£这大大便利了活体细胞的观察£¬因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜¡£

1.相衬镜检法在装置上与明场不同£¬有一些特殊要求£º
(1) 环状光阑£¨Ringslit£©£º装在聚光镜的下方£¬而与聚光镜组合为一体¡ª¡ª相衬聚光镜¡£它是由大小不同的环形光阑装在一Ô才Ì内£¬外面标有10X¡¢20X¡¢40X¡¢100X等字样£¬与相对应倍数的物镜配合使用¡£
(2) 相板£¨Phase plate£©£º 装在物镜的后焦平面处£¬它分为两部分£¬一是通过直射光的部分£¬为半透明的环状£¬叫共轭面£»另一是通过衍射光的部分£¬½小°补偿面¡薄£有相板的物镜称¡°相衬物镜¡±£¬外壳上常有¡°Ph¡±字样¡£
2. 相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法£¬想要得到好的观察效果£¬显微镜的调试非常重要¡£除此之外还应注意以下几个方面¡£
 (1)光源要强£¬全部开启孔径光阑£»
 (2) 使用滤色片£¬使光波近于单色£»

四¡¢微分干涉相衬镜检术£¨Differential interferencecontrast DIC£©
微分干涉相衬镜检术出现于60年代£¬它不仅能观察无色透明的物体£¬而且图像呈现出浮雕壮的立体感£¬并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点£¬观察效果更为逼真¡£

1£®原理
微分干涉相衬镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束¡£·至Ñ出来的光束的振动方向相互垂直Ç仪¿度相等£¬光束·直ð在距离很近的两点上通过被检物体£¬在相位上略有差别¡£由于两光束的裂距极小£¬而不出Ï种Ø影现像£¬使图像呈现出立体的三维感觉¡£
2£®微分干涉相衬镜检术所需的特殊部件£º
(1)起偏镜
(2)检偏镜
(3)渥拉斯顿棱镜2 块
3£®微分干涉镜检时的注意事项
(1)因微分干涉相衬灵敏度高£¬制片表面不能有污物和»页尽£
(2)具有双折射性的物质£¬不能达到微分干涉相衬镜检的效果¡£
(3)倒置显微镜应用微分干涉相衬时£¬不能用塑料培养皿¡£

五¡¢荧光镜检术
荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体£¬使之受激发后而产生长波长的荧光£¬然后观察¡£荧光镜检术广泛应用于生物£¬医学等领域¡£

1£®荧光镜检术一般分为透射和落射式两种类型¡£
(1)透射式£º激发光来自被检物体的下方£¬聚光镜为暗视野聚光镜£¬使激发光不进入物镜£¬而使荧光进入物镜¡£它在低倍情况下明亮£¬而高倍则暗£¬在油浸物镜下较难操作£¬尤以低倍的照明范围难于È范¨£¬但能得到很暗的视野背景¡£透射式不适用于非透明的被检物体¡£
(2)落射式£和¸射式Ä壳°几乎被淘汰£¬新型的荧光显微镜多为落射式£¬光源来自被检物体的上方£¬在光路中具有分光镜£¬所以对透明和不透明的被检物体¶际Ê用¡£由于物镜起了聚光镜的作用£¬不仅便于操作£¬而且从低倍到高倍£¬可以实现整个视场的均匀照明¡£
2£®荧光镜检术的注意事项
(1)激发光长时间的照射£¬会发生荧光的衰减和淬灭现像£¬因此尽可能缩短观察时间£¬暂时不观察时£¬应用挡板遮盖激发光¡£
(2)作油镜观察时£¬应用¡°无荧光油¡薄£
(3)荧光几乎都较弱£¬应在较暗的室内进行¡£
(4)电源最好装稳压器£¬否则电压不稳不仅会½档Í汞灯的寿命£¬也会影响镜检的效果¡£

六¡¢偏光显微镜
1£®偏光显微镜的特点
偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜¡£凡具有双折射的物质£¬在偏光显微镜下就能·直æ清楚£¬µ比»这些物质也可用染色发来进行观察£¬但有些则不可能£¬而必须利用偏光显微镜¡£偏光显微镜的特点£¬就是将普通光改变为偏光进行镜检的方法£¬以鉴别某一物质是单折射£¨各向同行£©或双折射性£¨各向异性£©¡£双折射性是晶体的基本特性¡£因此£¬偏光显微镜被广泛地应用在矿物£¬化学等领域¡£在生物学和植物学也有应用¡£
2£®偏光显微镜的基本原理
偏光显微镜的原理比较复杂£¬在此不作过多介绍,偏光显微镜必须具备以下附件£¨a£©起偏镜 £¨b£©检偏镜 £¨c£©专用无应力物镜£¨d£©旋转载物台¡£
3£®偏光镜检术的方式
(1) 正相镜检£¨Orthscope£©£º又称无畸变镜检£¬其特点是使用低倍物镜£¬不用伯特兰透镜£¨Bertrand Lens£©,同时为使照明孔径变小£¬推开聚光镜的上透镜¡£正相镜检用于检查物体的双折射性¡£
(2) 锥光镜检£¨Conoscope£©£º又³聘É涉镜检£¬这种方法用于观察物体的单轴或双轴性¡£
4£®偏光显微镜在装置上的要求
(1)光源£º最好采用单色光£¬因为光的速度£¬折射率£¬和干涉现像因波长的不同而有差异¡£一般镜检可使用普通光¡£
(2) 目镜£º要带有十字线的目镜¡£
(3)聚光镜£何ª了取得平行偏光£¬应使用能推出上透镜的摇出式聚光镜¡£
(4)伯特兰透镜£º这是把物体所有造成的初级相放大为次级相的辅助透镜¡£
5. 偏光镜检术的要求
(1) 载物台的中心与光轴同轴¡£
(2) 起偏镜和检偏镜应处于正交位置¡£
(3) 制片不宜过薄¡£
七¡¢体视显微镜£¨Stereomicroscope£©
体视显微镜又称¡°实体显微镜¡被ò¡°解剖镜¡±£¬是一种具有正像立体感地目视仪器£¬被广泛地应用于生物学¡¢医学¡¢农林¡¢工业及海洋生物各部门¡£它具有如下地特点£º
(1)£® 双目镜筒中的左右两光束不是平行£¬而是具有一定的夹角¡ª¡ª体视角£¨一般为12度---15度£©£¬因此³上ñ具有三维立体感£»
(2)£® 像是直立的£¬便于操作和解剖£¬这是由于在目镜下方的棱镜把像倒转过来的Ô倒Ê£»
(3)£® 虽È环Å大率不如常规显微镜£¬但其工作距离很长
(4)£® 焦深大£¬便于观察被检物体的全层¡£
(5)£® 视场Ö本¶大¡£

原文链接£ºhttp://www.4kex.com/news/201153161855.htm

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